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1. 實驗原理
實驗經(jīng)除去蛋白質后,在加熱條件下,以亞甲基藍為指示劑,滴定標定過的堿性酒石酸銅溶液(用還原糖標準溶液標定),根據(jù)樣品液消耗體積計算還原糖含量。
2. 實驗藥品與試劑
硫酸銅、亞甲基藍指示劑、酒石酸鉀鈉、氫氧化鈉、乙酸鋅、冰乙酸、亞鐵氰hua鉀、葡萄糖、氫氧化鈉溶液(40g/L)
堿性酒石酸銅甲液:稱取15g硫酸銅及0.05g亞甲藍加適量水溶解至1000ml 堿性酒石酸銅乙液:稱取50g酒石酸鉀鈉與75g氫氧化鈉,加適量水溶解,再加4g亞鐵氰hua鉀,*溶解后稀釋至1000ml,貯存于橡膠塞玻璃瓶中。 鹽酸溶液:量取50ml鹽酸加水稀釋至100ml。
葡萄糖標液:稱取1.0g干燥2h后的葡萄糖,加水溶解并加入5ml鹽酸,并以水稀釋到1000ml,此溶液每毫克相當于1.0mg葡萄糖。
3.儀器
25ml滴定管、250 ml容量瓶、150ml錐形瓶、玻璃珠、 真空泵、電子天平、可調電爐(帶石棉板)
4.實驗步驟
4.1 樣品處理:
一般食品是稱取粉碎后的樣品2.5~5g或吸取5~25g液體樣品,置于250 ml容量瓶中,加50ml水,搖勻。加入5ml 乙酸鋅溶液及5ml亞鐵氰hua鉀溶液,加水至刻度,混勻。靜置30min,用干燥濾紙過濾,棄去初濾液,濾液備用。
4.2標定堿性酒石酸銅溶液:
吸取5.0g堿性酒石酸銅甲液及乙液,于150ml錐形瓶中 加水10ml,加入玻璃珠兩粒,從滴定管滴加約9ml葡萄糖或其他還原糖標液,控制在2min內(nèi)加熱至沸,趁熱以1滴/2s的速度繼續(xù)滴加葡萄糖或其他還原糖標液至藍色剛好褪去,即為終點,記錄消耗體積,平行測定3次并取平均值,計算每10ml酒石酸銅溶液(甲、乙各5ml)相當于多少葡萄糖或其他還原糖的質量(mg)。
4.3試樣溶液預測:
吸取5.0g堿性酒石酸銅甲液及乙液,于150ml錐形瓶中 加水10ml,加入玻璃珠兩粒,控制在2min內(nèi)加熱至沸,保持沸騰以先快后慢的速度,從滴定管中滴加試樣溶液,病保持溶液沸騰狀態(tài),待溶液顏色變淺時,以1滴/2秒的速度滴定,直至藍色剛好褪去即為終點,記錄樣液消耗體積。
4.4樣品測定:
吸取5.0g堿性酒石酸銅甲液及乙液,于150ml錐形瓶中 加水10ml,加入玻璃珠兩粒,從滴定管滴加比預測體積少1ml的試樣溶液至錐形瓶中,使在2min內(nèi)加熱至沸,保持沸騰繼續(xù)以1滴/2秒的速度滴定,直至藍色剛好褪去即為終
點,記錄樣液消耗體積,平行測定3次,得出平均消耗體積。
5.計算
式中:
X—樣品中還原糖的含量(g/100g)
V—測定用樣品時平均消耗溶液的體積(ml) m—試樣質量(g)
m1—堿性酒石酸銅溶液相當于某種還原糖的質量(mg)